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腺病毒载体构建
来源: | 作者:proef7446 | 发布时间: 1925天前 | 4220 次浏览 | 分享到:
腺病毒(Adenovirus,AdV)是一种非整合型双链DNA病毒。由于其可以感染呼吸道和消化道,不仅可以静脉注射,还可以通过口服经肠道吸收,或通过喷雾、滴注经呼吸道吸收,使得它所介导的基因治疗易于推广应用,并且腺病毒易于制备、纯化和浓缩,外源基因装载容量大,所以重组腺病毒已越来越广泛地被应用于基础研究和临床试验中,并成为世界上最常用的基因治疗载体之一。




百菱生物生物所用的腺病毒包装系统是AdMax系统。它的工作原理是将携带外源基因的腺病毒穿梭质粒与携带了腺病毒大部分基因组的辅助包装质粒共转染HEK293细胞,利用Cre/loxP(或FLP/frt)重组酶系统的作用实现重 组,产生重组腺病毒。
这个系统操作简便、重组效率高、获得的病毒产率高、目的基因的表达水平高,与目前使用最普及的AdEasy系统相比,有一定的优势:AdMax系统只需要2~4周就能完成从质粒构建到重组出毒,成功率大于98%,因在真核细胞内重组出毒,保持了对腺病毒的生存压力,有助于重组腺病毒的基因组的完整性,并且病毒的产率(Yielding)明显提高。
服务详情:

服务内容

提供产品及数量

实验周期

载体构建

构建报告

2~4

慢病毒

过表达慢病毒

1ml 1×108 TU/ml

40工作日

shRNA慢病毒

1ml 1×108 TU/ml

20工作日

对照慢病毒

200μl1×108 TU/ml

/

滴度检测

2

/

腺病毒

病毒包装

上清10ml 1×108~9 PFU/ml

2~3

ADGFP对照腺病毒

1~2×1011 PFU/ml

/

滴度检测

2

/

目的基因RT-qPCR检测

检测报告单

5工作日

目的蛋白表达WB检测(客户提供一抗)

检测报告单

1~2