该文章转载自：莫纳生物

众所周知，逆转录是 RT-PCR 实验的关键一步，逆转录酶也是此步骤中不可或缺的“灵魂角色”，那么，小伙伴们对它们是否有着充分的了解呢？

今天，莫纳生物逆转录系列知识科普正式开启！本系列共分为三部分，这一期，琴子将为您带来第一部分——酶的发现、逆转录过程及 M-MLV 与 AMV 的区别。

接下来就请与我一同走进逆转录的世界吧！

逆转录的实验目的就是要高效地获得 cDNA，要达成这个目的，就要考虑如何选择试剂。而在试剂选择中，酶的选择是非常关键的。

逆转录酶，全称是依赖于 RNA 的 DNA 聚合酶，最早发现于部分 RNA 病毒中，具有逆转录活性，能够以单链 RNA 为模板合成 DNA 的酶。

逆转录酶最初是在 1970 年由霍华德·马丁·特明（Howard Temin）和戴维·巴尔的摩（David Baltimore）从 RNA 病毒中发现的。他们并因此获得 1975 年度诺贝尔生理学或医学奖。

人类免疫缺陷病毒1型的逆转录酶（PDB：HIV）

莫洛尼鼠白血病病毒的逆转录酶（MMLV）

禽成髓细胞瘤病毒的逆转录酶 （AMV）

维持真核细胞的染色体端粒存在的端粒酶逆转录酶

AMV 和 MMLV 是分子 PCR 检测常用的两种逆转录酶。AMV 反转录酶来源于禽类的病毒，RNaseH 活性较高，一边做反转录，一边就把 RNA 降解了，所以 AMV 反转录酶的反转录效率比较低。M-MLV 反转录酶来源于鼠类，它的 RNaseH 活性较低，所以反转录效率是比较高的。虽然野生型 M-MLV 逆转录酶的热稳定性差，抵抗二级结构的能力弱，但可以通过基因改造弥补这些不足。

（野生型）M-MLV 和 AMV 的区别

我们知道逆转录酶由不同生化活性的不同结构酶组成，其中逆转录活性和 RNaseH 活性决定了逆转录酶的性能。逆转录活性与酶的热稳定性密切相关。

下一期，我将带大家详细了解逆转录酶 RNaseH 活性和热稳定性对逆转录的影响，以及如何选择逆转录酶，大家敬请期待吧！

莫纳生物逆转录酶具有高热稳定性，较低 RNase H 活性，大幅提升了逆转录效率和 RNA 复杂二级结构的耐受性，特异性更好、产率更高、更容易获得全长 cDNA，最长可达 12kb。

莫纳生物一步法与两步法产品的区别

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