细胞转染
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作者:proef7446
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发布时间: 1906天前
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质脂体为人工膜泡，可作为体内、体外物质转送载体。将需转移的DNA或RNA包裹于质脂体，由于质脂体具有磷脂双层与胞膜相似，因此，可与细胞膜融合，将DNA转入宿主细胞。
1.质脂体转染
质脂体为人工膜泡，可作为体内、体外物质转送载体。将需转移的DNA或RNA包裹于质脂体，由于质脂体具有磷脂双层与胞膜相似，因此，可与细胞膜融合，将DNA转入宿主细胞。影响转染效率差异的主要原因是细胞系间个体的差异，有的细胞系本生不容易被转染，而有的细胞系细胞膜通透性较好，质脂体复合物较容易进入细胞，转染效率就高。其次脂类与DNA形成易于转染结构的特性存在负面效应，其中主要的问题是毒性，表现为细胞聚集在一起，从壁上脱落。另外脂质体转染容易受到血清中的脂肪、脂蛋白以及细胞外基质中带电成分（如硫酸软骨素等）干扰引起细胞死亡，从而影响转染效率。
2.电穿孔转染
核酸不能自动进入细胞，需要协助才能穿过细胞壁的物理屏障进入能够进行表达和/或复制的胞内位点。电流能够可逆地击穿细胞膜形成瞬时的水通路或膜上小孔促使DNA分子进入胞内，这种方法就是电穿孔。电穿孔的主要应用优势是适用的细胞范围广，不论真核细胞还是原核细胞都能被有效转染。当遇到某些脂质体转染效率很低或几乎无法转入时建议使用电穿孔转染。
一般情况下，高电场强度会杀死50~70%的细胞。这种致命的后果根据细胞系的不同而异，与加热或电解无关，也与当时施加的能量与密度无关。相反，细胞死亡与电场强度、整体作用时间相关。赛哲针对细胞死亡开发出了一种电转保护剂，大大的降低了细胞的死亡率，同时也提高了电穿孔转染效率。
3.DEAE-葡聚糖转染
DEAE-葡聚糖介导的转染，其原理尚不清楚，可能是通过内吞噬作用而使DNA转导进入细胞核，此法只适合暂时转染实验，转染效率与DEAE-葡聚糖浓度、细胞与DNA/DEAE-葡聚糖混合液接触时间的长短很有关系，可采用较高浓度的DEAE-葡聚糖（1g/L）作用较短时间（30~90min），又可用较低浓度（250g/L）的DEAE-葡聚糖作用较长时间（8h）。
4.磷酸钙-DNA共沉淀法
核酸以磷酸钙-DNA共沉淀物的形式出现时，可使DNA附在细胞表面，利于细胞吞入摄取，或通过细胞膜脂相收缩时裂开的空隙进入细胞内，进入细胞的DNA仅有1~5%可以进入细胞核中，其中仅有不到1%的DNA可以与细胞DNA整合，在细胞中进行稳定表达，基因转导的频率大约为10-4，这项技术能用于任何DNA导入哺乳类动物进行暂时性表达或长期转化的研究，此方法对于贴壁细胞转染是最常用并首选的方法。
5.科研实例
