本制品是通过采用分子进化技术对普通Pfu酶进行改造而获得的新型Fast Pfu酶,是新一代的高保真DNA聚合酶。该酶解决了高保真PCR反应中Pfu酶扩增灵敏度低、延伸速度缓慢的难题,能够高效、快速扩增≤6kb片段目的基因片段(最长可达20kb),模板低至0.05ng,并且在DNA末端补平、全基因合成、引入突变等之中有着很好的应用。
高保真:保真度高于Pfu酶,为普通Taq酶的50倍。
快速高效:Fast Pfu扩增速度为普通Pfu酶的数倍,72℃保温30秒可延伸1kb以上。扩增长度可达20kb,能高效扩增≤6kb片段。
高灵敏:可从0.05ng人基因组DNA模板中扩增出1.2kb特定基因片段,扩增性能显著优于普通Pfu酶。
独特配方的5×Buffer:使PCR扩增反应更加稳定、灵敏、高效。
Fast Pfu DNA聚合酶产生的PCR产物为平末端,无3´端"A"突出,除使用NovoRec® PCR一步定向克隆试剂盒(Cat. No: NR005)外,其它PCR产物的克隆方案有:
1)PCR前引物进行5´端加磷修饰或将PCR产物磷酸化处理后再直接克隆于平末端的载体中。
2)将产物3´末端加A后再与T载体连接。
3)由于Fast Pfu DNA聚合酶的校对活性可引起引物从3´端被部分降解。因此在设计引物时应适当增加引物的长度,理想的引物长度为20~30mers。另外为了减少由3´→5´外切酶活性引起的引物降解,尽量在冰上配制反应体系,并最后加入Fast Pfu DNA聚合酶。
1)对高GC含量模板,建议将变性温度提高到98℃。
2)对于高GC模板,建议配套使用PCR增强剂III(Cat. No: E055),或者添加终浓度为5%-8% DMSO。