CRISPR相关蛋白Cas9已经广泛应用于基因组编辑,相比于Cas9蛋白,Cas12a具有类似的基因组编辑效率,但具有较低的脱靶效率,在基因治疗应用中具有巨大的潜力。
不同于Cas9蛋白,Cas12a不需要tracrRNA,只需要单个由41-44nt核苷酸组成的crRNA引导。与Cas9需要富含G的PAM相反,Cas12a-crRNA复合物通过识别富含T(5'-TTTN-3')的PAM基序来切割靶DNA。Cas12a执行剪切后的DNA双链断裂引入了4或5个核苷酸突出的粘性末端。
本制品来源于Lachnospiraceae bacterium,在蛋白两端分别加了核定位信号(NLS),当Cas12a 以NLS序列表达时,Cas12a-RNP复合体可以在进入细胞后立即定位到细胞核。无需体内转录或翻译,提高了该方法在质粒系统上的效率。另外,本产品还具有一种trans切割的活力,即一旦靶标dsDNA、crRNA和Cas12a蛋白形成三元复合体时,特异性切割靶标dsDNA的同时,会非特异切割体系中其他的ssDNA。这促使Cas12a可以作为一种新型的基因检测和成像的工具。
基于蛋白与sgRNA转染的非病毒载体CRISPR基因敲除;
基于蛋白与sgRNA转染的非病毒载体CRISPR基因敲入;
sgRNA剪切靶点DNA效率检测,降低体内筛选成本;
体外剪切靶DNA的特异位点。
纯蛋白体系,避免CRISPR基因敲除时引入质粒或病毒干扰;
可显著降低脱靶效应。