快奔走相告，提取RNA再也不需要氯仿啦！
来源:
|
作者:百菱生物
|
发布时间: 259天前
|
1231 次浏览
|
分享到:
氯仿，又叫三氯甲烷 ( CHCl3），有中等毒性，可以经消化道、呼吸道、皮肤接触进入机体，现在管控严格，非常不容易购买。因为氯仿而焦头烂额的科研 er 们，是时候该抛弃它啦！
作为生物科研人，RNA 提取想必是大部分人都会涉及到的基础实验，但你还在用传统的Trizol 法提取 RNA 吗？Trizol 法的关键步骤是加入氯仿，离心进行分相，一涉及到氯仿，事情就变得麻烦了起来。
氯仿，又叫三氯甲烷 ( CHCl3），有中等毒性，可以经消化道、呼吸道、皮肤接触进入机体，现在管控严格，非常不容易购买。因为氯仿而焦头烂额的科研 er 们，是时候该抛弃它啦！
Monzol™ Reagent Pro
■ 一盒多用，兼容总 RNA、miRNA和大片段 RNA 的分离纯化
■ 样本提取得率高，提取产物纯度高，gDNA 残留量低■ 适用样本范围广，包含各种动物组织和体液、植物、培养细胞、细菌、酵母、病毒样品等
不同样本 RNA 提取效果图
不同品牌提取 RNA 的浓度图
不同品牌提取 RNA 的 gDNA 残留量
说到这里，可能大家还是会好奇，不用氯仿怎么才能完成 RNA 提取呢？小编今天就以使用Monzol™ Reagent Pro 提取组织样本中总 RNA 为例，带大家详细了解一下操作步骤及注意事项吧~
总RNA提取示意图
样本前处理
在研钵中用液氮将约 100~200 mg 组织研磨至粉末状，用液氮预冷过的 1.5 mL离心管称取 25~100 mg 组织，加入500 μL Monzol ™ Reagent Pro试剂（注意尽量在组织粉末尚未融化前加入），盖上管盖用力摇晃混合均匀。
研磨组织
每管加入500 μL Monzol ™ Reagent Pro
总RNA提取
1）加入200 µL RNase-free水，用力摇晃15秒，13,000 rpm (11,750 g) 离心15分钟。
注意全程常温离心，否则可能会因为低温而导致Monzol™ Reagent Pro试剂浑浊分相
2）离心后溶液分成上层水相（含 RNA）和深色的下层沉淀（含蛋白质、DNA、多糖等杂质），小心吸取 500 µL上清液到一个新的 RNase-free 1.5 mL离心管中。
取上清，注意尽量不要吸取到下层的沉淀
3）加入 500 µL异丙醇，混合均匀，13,000 rpm (11,750 g) 离心 10 分钟，弃上清。
加入异丙醇离心后，弃上清，取沉淀
4）加入 1 mL 75% 乙醇，温和地翻转离心管 4~6 次，11,000 rpm (8413 g) 离心 5 分钟，弃上清。
如果观察到 RNA 沉淀较多，可重复洗涤一次，以减少 RNA 中盐分的残留
5）弃去大部分上清后，短暂低速离心将残留液体甩至管底，用 200 µL吸头吸尽残留的乙醇，保留管底及管壁的白色 RNA 沉淀。加入 50~100 µL RNase-free 水溶解 RNA，并将 RNA 储存于 -70℃以下备用。
这样，RNA提取就完成了，是不是快速又高效呢~
此等好物，如果你心动了，就快来试一试吧！
新品优惠多多，欢迎咨询订购哦
