label free 非标定量蛋白质组学

 蛋白质非标记定量技术（label-free）是通过液质联用技术对蛋白质酶解肽段进行质谱分析，无需使用昂贵的稳定同位素标签做内部标准，只需分析大规模鉴定蛋白质时所产生的质谱数据，比较不同样品中相应肽段的信号强度，从而对肽段对应的蛋白质进行相对定量。Label-free的技术优势就在于蛋白质不需要进行标记，所需样品总量少，耗费低。

技术原理

                                                                                                 label free流程示意图

非标记定量蛋白质组学近年来成为重要的质谱定量方法，按照其原理分，主要有两种。其中spectrum counts类的非标记定量方法，发展比较早，也形成了多种算法进行定量，但是主要的原理都是根据MS2的鉴定结果作为定量的基础，各种方法的差别在于后期算法在大规模数据上的修正。第二种非标记定量方法的原理是以MS1为基础，计算每个肽段信号在LCMS质谱上的积分，这个也是本公司所采用的Maxquant算法的原理。

 服务流程

技术优势

1.无需昂贵的同位素标签标记，实验耗费低，操作简单；

2.对样本的操作少，并且不受样本数目的现在，客服了标记定量技术在对多个样本进行定量方面的缺陷；

3.可以检测到的肽段动态范围可以达到4个数量级以上，提高低丰度蛋白的检出率和非标定量的准确性；

4.可以检测不同组样本中有无差异的蛋白变化；

5.样本需求量少

仪器类型

Thermo Scientific Q Exactive

样本要求

1.蛋白运输：24小时内可以4℃运输；

2.蛋白长期保存：-20℃；

3.待检测蛋白要求：蛋白量最低300μg，浓度最低要求为1μg/μl，否则同位素无法标记；

4.蛋白提取试剂要求：使用普通的组织、细胞裂解液即可，切忌不要使用二维电泳试剂提取；

5.直接提供组织或细胞：动物、微生物组织湿重>10mg;植物鲜嫩组织>100mg;细胞量>10⁷个;血液体积>500μl。